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提高黄原胶丙酮酸含量的发酵实践

发布日期:2015-03-25 12:33:16
黄原胶丙酮酸发酵
黄原胶是最具有工业应用价值的微生物多糖, 它是由黄单胞杆菌(Xanthomonas Campestris)以碳水 化合物为主要底物黄原胶丙酮酸发酵而成的酸性胞外杂多糖,其 生物合成机制为“非模板合成机制黄原胶的〃五糖 重复单元〃主链由两个D-葡萄糖分子经p-(1!4)糖 苷键连接而成,在一个D-葡萄糖分子上连接一条由 两个D-甘露糖和一个D-葡萄糖醛酸组成的侧链, 侧链携有乙酸和丙酮酸。
黄原胶具有优良的增粘性、触变性或假塑性,对 高浓度盐与强酸碱有很强的适应能力。这些独特的 性能是因为它比一般的高分子含有更多的官能团, 而其中分子侧链上的丙酮酸起着重要作用。通常情 况下,黄原胶中丙酮酸含量的高低与胶的性能优劣 成正相关。因此,通过改善发酵过程丙酮酸含量的途 径,对提高黄原胶的质量有重要意义。
1材料与方法
1.1实验材料
甘兰黑腐病黄单抱菌(Xanthomonas Campestris) XC-XH99系列诱变株经硫酸二甲酯(DMS)与低剂 量C〇60连续二次复合处理获得,河北新河生物工程 技术研宄所菌种室保存;斜面培养基(g/100ml) 蔗糖 2.0,酵母膏0.1,蛋白胨0.5,牛肉膏0.3,琼脂2.0,初
收稿曰期:2002-04-08
作者简介:张禹(1966-),男,工程师,研宄生,研宄方向:生物多糖发 酵、提炼工艺改进。
始pH7.0;种子培养基(g/100ml)蔗糖2.0,酵母膏
0.1,蛋白胨0.5,牛肉膏0.3,初始pH7.0;发酵培养基 (g/100ml)玉米淀粉4.5,蛋白胨0.05,豆粕粉0.15,
柠檬酸 0.15,NH4N〇3 0.1,MgS〇4 0.002,CaC〇30.2, FeCl3 0.03,K2HP〇4 0.2,初始 pH7.2。
1.2测定方法
1.2.1 黄原胶含量测定对发酵液升温100~105P, 维持30min,降至35±1P,加入适量碱性蛋白酶和溶 菌酶,过滤后发酵液与95R食用级酒精按1:1.2体积 混合,充分搅拌得胶体沉淀,洗涤后真空干燥,称重。
1.2.2发酵液粘度测定 NDJ-4型旋转粘度计, 25P,转速30r/min,4号转子。
1.2.3丙酮酸含量测定按Duckworth的酶法测定A 酶制剂为乳酸脱氢酶与还原性辅酶I(NADH)。
1.3发酵装置
1.3.1—级种子罐容量0.5m3,装液量75%,高径 比2.5,单层平叶搅拌浆,有挡板。
1.3.2 二级种子罐容量5m3,装液量75%,高径比 2.5,双层平叶搅拌浆,无挡板。
1.3.3发酵罐容量50m3,装液量70%c,高径比3.1。
据表1结果,本课题试验选用Rs菌株进行。
2.2不同溶氧水平对黄原胶产量和丙酮酸含量的影响 相同的一级种子、二级种子培养过程,在同一发 酵罐采用相同配方,调节风量和压力,控制不同的溶 氧水平。发酵温度为30±1+,搅拌速度160r/min,PH 控制在7±0.5。试验结果如表2所示。
表2 50m3生产罐发酵结果 溶解氧(%)102030405060
丙酮酸含量(%)1.412.963.523.613.713.59
发酵液粘度(mPa%)145001800026000260002680027000
产胶量(g/100ml)2.422.683.263.303.213.30
表2表明,溶解氧与丙酮酸含量有直接关系,在 一定范围内,随着溶氧水平的提高,丙酮酸含量上 升,但并不是说溶解氧无限制提高,丙酮酸含量也无 限制增加。我们发现,当溶解氧水平高于50%时,将 不会帮助丙酮酸继续增加含量。同时,表2数据再次 验证了黄原胶产量高,丙酮酸含量不一定高的结论。 从本试验看,溶氧达到50%时对提高丙酮酸含量最 有效。
2.3有机酸对黄原胶产量和丙酮酸含量的影响
谷氨酸2.783#6226000
丙酮酸2.692#9825000
D.L苹果酸2.613#0224500
柠檬酸3.283#5826500
对照样(未加有机酸)2.603#7224000
不同种类有机酸的加入,黄原胶中丙酮酸含量 均有不同程度的下降,但胶的产量有了明显提高。这 可能因为在黄原胶合成过程的三羧酸循环中,有机 酸作为某一异构酶的抑制剂而起了不同的作用,这 种酶在丙酮酸的缩合中起着关键作用658。
2.4不同碳氮比(C/N)对发酵周期的影响以及不同 发酵周期对黄原胶产量和丙酮酸含量的影响
通常在限制N的条件下,较低的C/N有助于菌 体的生长,较高的C/N加快黄原胶的合成。表4是不 同C/N对发酵周期的影响结果。不同发酵周期与黄 原胶产量、丙酮酸含量的关系如表5所示。
表4 50m3发酵罐发酵周期与C/N的关系
碳氮比(C/N)10:120:140:150:160:1
周期 (h)150132958564
残糖(%)0#50.450#30#20#1
C/N对发酵速度、发酵周期有重要影响,从对数 生长期开始,采用高的C/N(大约50<1)促进黄原胶的 合成。同一批黄原胶发酵随周期的延长,丙酮酸含量 不断增加。因此C/N通过控制生长速度将其作用传 递给丙酮酸的合成。
2.5无机盐离子对黄原胶产量和丙酮酸含量的影响 据国外文献报道668,某些微量因子对生物多糖 合成中的磷酸烯醇式丙酮酸与丙酮酸化机制有直接 影响。按发酵培养基配方,我们对某一无机盐加入 量做了一定程度的限制,在其它成分不改变的情况 下,分别对五种无机盐的影响作了对照试验,结果见 表 6。
表6各无机盐对黄原胶合成的影响
被限制的无机盐含量 (g/100ml)丙酮酸含 量(%)胶产量 (g/100ml)发酵液粘度 (mPa.s )
0.02 NH4NO33.283#1925000
0.05 K2HPO42.142#7416000
0#0002 MgSO42.862#9723500
0#003 FeCl33.723#2125800
0#02 CaCO33.612#9826000
基础培养基3.683#2626500
表6说明,无机盐离子对黄原胶中的丙酮酸含 量有不同程度的影响。当限制了 Ca2?或NH/的浓度 时(分别为基础配方的10%与20%),丙酮酸含量降 低幅度较小;当限制K?或Mg2?浓度时(各取基础配 方的25%与10%)丙酮酸含量有明显下降;当限制 了 Fe3?浓度时(为基础配方的10%),丙酮酸含量得 到提高。