联系我们 / Contact

  • 山东东达纤维素有限公司
  • 联系人:王伟
  • 电 话:0533-8299008 13280657534
  • 手 机:13280657534
  • 传 真:请填写您的传真
  • 邮 箱:sddachina@163.com
  • 网 址:http://www.sdcmcchina.com/
  • 地 址:山东省淄博市周村区开发区工业园16号

高丙酮酸黄原胶发酵与流变特性研究

发布日期:2014-10-08 13:31:08
高丙酮酸黄原胶发酵与流变特性研究介绍
高丙酮酸黄原胶发酵与流变特性研究
高丙酮酸黄原胶发酵与流变特性研究,研究了高丙酮酸含量黄原胶的发酵液的流变学特性,发现黄原胶平均分子质量和丙酮酸含量均随发酵 时间变化,并在对数生长期结束时都达到最大,此时平均分子质量为6 〇x 106u,丙酮酸质量分数为5. 9%。黄 原胶平均分子质量和丙酮酸含量对黄原胶溶液的流变学特性均有明显影响;在电解质(1% KCl)溶液中,黄原胶 的丙酮酸含量越高,其粘度越大,剪切变稀性能越显著,且高丙酮酸黄原胶具有低浓度下高表观粘度的特性。 
黄原胶是一种具有重要工业应用价值的微生物 多糖,它是由黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris) 以碳水化合物为主要底物经发酵而成的高分子胞外 杂多糖。它的基本结构是五糖重复单元,在以D-葡 萄糖以&D-1,4-葡萄糖苷键连接的纤维素主链上, 由1个葡萄糖醛酸残基夹在2个甘露糖单位中间组 成三糖侧链,以糖苷键交替连于葡糖单位的C-3位 上;乙酸以酯的形式连于侧链内部的甘露糖上,高丙酮酸黄原胶发酵与流变特性研究,而丙 酮酸与末端的甘露糖缩合成缩酮。其平均分子质量、 乙酰基和丙酮酸的含量不仅与菌种密切相关11 ],而且 不同的发酵条件对其也有重要影响[2]。
黄原胶的流变学特性不仅与黄原胶的平均分子质 量和分子质量分布有关,还与其分子中乙酰基和丙 酮酸基团含量有关[4]。其中丙酮酸含量变化会影响黄 原胶大分子的空间排列、电荷在大分子上的分布以及 大分子的交联等,引起黄原胶溶液粘度和耐温性变化, 从而赋予黄原胶许多独特的流变学和功能特性。
文中主要研究了高丙酮酸含量黄原胶发酵液的 流变学特性,考察了发酵时间对黄原胶分子质量和丙 酮酸含量的影响,并探讨了分子质量和丙酮酸基团与 黄原胶流变学特性之间的关系。
1材料与方法
1.1材料
出发菌种:Xanthomonas campestris WXB- CLZ0403,江南大学生化工程研究室保存。
斜面培养基(g/ L):蔗糖20;蛋白胨5;牛肉膏3;
酵母膏1;琼脂20; pH 7.0~ 7. 2。
种子培养基(g/L):蔗糖20;蛋白胨5;牛肉膏3; 酵母膏 1;pH 7. 0~ 7. 2。
发酵培养基(g/L):淀粉50; NH4CI 2 5;酵母膏 1; MgS〇4 2. 5; CaC〇3 6; pH 7. 0~ 7. 2。
黄原胶样品:分别为HPX(本文所述工艺制备的 样品 I ),LPX(样品 II),M PX(样品 IIJ,Kelco630( C. P. Kelco, W);将黄原胶样品配制成质量浓度为 0■ 5%的溶液,16 000 I./ min离心30 min,弃沉淀,上 清液用1% KCl透析,将黄原胶转化为钾盐形式的黄 原胶,再用去离子水反复透析,最后冷冻干燥。
1.2细胞培养
将斜面种子接种到摇瓶种子培养基中,置于220 I/ min的摇床,29 °C下恒温培养21 h,取2. 5 mL种子 培养液接种到装有30 mL发酵培养基的250 mL三 角瓶中,于220 i/ min的摇床,29 °C下恒温培养72 h。 1. 3分析方法
所有分析用发酵液在取样后立即离心除菌体。 根据发酵液的粘度,将其用1%的KCl溶液稀释2~ 6 倍,于12 000 i/min下离心30~ 50 min,沉淀菌体,然 后将沉淀溶于一定体积去离子水中,测定生物量,最 后收集上清液,测定还原糖、产胶率及丙酮酸含量。 1.3.1生物量测定
将上述沉淀溶于去离子水中,添加少量HCl,再 离心弃上清液,将菌体沉淀溶于去离子水中,于650 nm下测OD值,对照标准曲线计算生物量。
1.3.2产胶率测定
发酵液中黄原胶含量小于3 g/L时,通过发酵液 粘度和胶含量的关系,用Brookfield DV-E粘度计1 号转子于100 i/min下测发酵液粘度,确定产胶率[51;其他情况下,将上清液用约2~ 3倍体积的 95%乙醇沉淀,洗涤,在12 000 r/min下离心30 min,
收集沉淀,60 °C下真空干燥24 h称干重,计算黄原胶
产量。
1.3.3还原糖测定
发酵液中还原糖的测定采用3, 5■二硝基水杨酸 (DNS)比色法。
1.3.4丙酮酸含量测定
准确称取一定量的黄原胶于1 mol/L的HCl中, 置于密闭容器内沸水浴水解3~ 4 h,采用2, 4-二硝 基苯肼(DNPH)比色法测定水解液中丙酮酸的含 量[61。
1.3.5分子质量测定
采用乌式粘度计测特性粘度的方法测定黄原胶 的分子质量。
1.4流变学性质研究
黄原胶发酵液和水溶液流变行为符合幂定律公 式:
n = k 1
其中,表观粘度n采用Brookfield DV-E粘度计 于室温(25 °C±2°C)下测定,高丙酮酸黄原胶发酵与流变特性研究,流态特性指数n和浓度 系数k通过Brookfield技术文件AR" 82对表观粘度
进行换算[7]。
2结果与讨论
2.1高丙酮酸黄原胶发酵过程的流变学特性
慕伞蠢屢M
 
2」 26^=-——,~~.~~,~■~~,~~■~~,~~1〇 」〇.〇 020406080
时间/h
■丙酮酸含量,♦平均分子量,〇细胞干重,
▼流态特性指数
图1黄原胶发酵液发酵过程中的流变特性,
平均分子质量和丙酮酸含量变化 黄原胶发酵液是典型的拟塑性流体,图1显示, 发酵液流态特性指数n随着时间延长越来越小,说 明发酵液粘度随着黄原胶产量的增加越来越大。黄 原胶中丙酮酸含量随发酵时间变化,图1显示,丙酮 酸含量从8 h时的3% —直增加到对数生长期结束时 的6. 0%左右;此后在生长稳定期内保持恒定不变。 若黄原胶的全部侧链均带有丙酮酸功能基团,则黄原 胶中丙酮酸含量则可达到理论最大值(质量分数 8.69%)。Shu和Yang[8]在研宄温度对黄原胶中丙 酉同酸含量的影响时也发现如此变化规律;而Cadmus 和Flores[9,101在研宄氮源对黄原胶中丙酮酸含量的 影响时也有类似发现。
同时从图1还发现,发酵过程中黄原胶平均分子 质量在菌体对数生长期迅速增加,并在生长期结束时 达到最大值6. 〇x 106u,此后在生长稳定期则保持不 变,这种变化与文献报道一致[1〇]。黄原胶平均分子 质量对黄原胶溶液的流变行为有明显影响[111,对最 终发酵液进行梯度稀释试验(用去离子水稀释消除丙 酮酸含量对黄原胶溶液粘度的影响,具体原因见2 2 节),稀释溶液中的黄原胶平均分子质量是不变的,其 流态特性指数n只与黄原胶浓度有关。
£^-tff*
 
黄原胶浓度/g.L-1
•稀释发酵液 〇发酵液
图2不同时间发酵液与稀释的对应浓度最终 发酵液的流态特性指数n的比较
图2对稀释的对应浓度的最终发酵液和发酵过 程中发酵液的流态特性指数n进行对比,结果发现, 随着黄原胶含量的增加,两者之间的差值越来越小, 在黄原胶含量大于10g/L时则趋于一致。由于在黄 原胶含量相同的情况下流态特性指数n只与其平均 分子质量有关,因此图2中进一步验证了黄原胶平均 分子质量随着发酵过程逐渐增加,且在黄原胶含量大 于10g/L(即菌体对数生长结束时)时黄原胶平均分 子质量保持恒定不变。
2. 2高丙酮酸黄原胶的流变特性 2. 2. 1丙酮酸含量对10 g/ L黄原胶溶液粘度的影响 对比1%HPX在不同环境中的粘度时发现,如图 3所示,两者的粘度均随转子转速的增加而降低,而 添加KCl的胶溶液在低转速(低剪切率)下有更高的 粘度,高转速(高剪切率)下则两者相差不大。同样对 样品(I ~ W) 1%的胶溶液作类似的比较(见表1), 
分子质量对粘度的影响不作讨论,丙酮酸对粘度的影 响以添加1% KCl前后粘度的变化率m为指标,如 图4所示,丙酮酸含量小于3%时,An比较小;•而当 丙酮酸含量大于3%时,丙酮酸含量越高,则越 大,并且随着剪切速率变小,An变得越来越大,其中 丙酮酸含量最高的HPX胶溶液的粘度变化较其他几 个样品在各剪切速率下都要更明显。证明在电解质 环境中高丙酮酸含量赋予黄原胶更优良的拟塑性和 低剪切速率下高粘度的特性。Smith[ 12]等人认为,由 于丙酮酸基团位于黄原胶螺旋结构的外围,当其丙酮 酸化程度大于0. 31时,高丙酮酸黄原胶发酵与流变特性研究,黄原胶溶液中的电解质将有 助于消除黄原胶大分子之间的静电斥力,使得大分子 之间的交联作用被丙酮酸甲基基团之间非极性相互 作用所促进,从而促使溶液的粘度有较大的提高。
的影响
对比不同浓度的HPX和MPX在KCl溶液中的 流变特性时发现(如图5所示),在黄原胶浓度较大 时,两样品的流态特性指数n相差不大,即流变学性 质相似;而在浓度较低时,HPX较MPX的流态特性 指数要小很多,此时它们的流变学性质显著不同。正 如图6所示,在2. 5 g/ L的黄原胶溶液中,HPX在低 剪切速率下表现出更高的粘度,在高剪切速率下两者 粘度相差不大,这说明HPX较MPX有更好的剪切 变稀性能。由表1可知,它们的平均分子质量相差不 大,主要的区别在于黄原胶中丙酮酸含量的差别,由 此可以推断高丙酮酸含量黄原胶具有低浓度下更优 越的拟塑性行为。 
IX钯锯
 
£ 蠢
 
 
 
▲去离子水中,_1%KCl溶液中 图3 1%HPX在去离子水和1% KCl溶液中流变曲线
 
 
转子转速(r/min): ▲0. 3, _3, *30 图4 1%样品溶液在添加1% KCl前后粘度的变化 表1黄原胶样品的物理化学性质参数
样品描述特性粘度/ /mL'g- 1粘均分子质量
x 10- 6/u丙酮酸质量 分数/ %
IHPX
(本文所述工艺制备)1 260 56. 15. 9
IILPX1 742 29. 61. 5
IIIMPX1 347 06. 63. 4
Kclco630 (C P. Kdco)1 75 8 59. 74. 9
.2. 2丙酮酸含量对不同浓度黄原胶溶液流变特性
A HPX, ■ MPX
图5 HPX和MPX在不同浓度下流态特性 指数n的比较
 
3讨论
通过研究发现,黄原胶的品质与黄原胶的分子质 量和丙酮酸含量密切相关,采用本摇瓶发酵工艺生产 的黄原胶,丙酮酸的质量分数高达6%左右,它赋予 黄原胶良好的拟塑性和低剪切速率下高粘度的特性。 高丙酮酸黄原胶发酵与流变特性研究,尤其在低浓度下,显示了与普通黄原胶不同的特性, 这意味着高丙酮酸含量黄原胶具有非常优异的悬浮 和稳定特性。另外丙酮酸含量的提高还有利于黄原 胶的耐酸性、协同效应的增强,水合速率的增大等。 
因此,黄原胶分子中丙酮酸的含量的提高将有益于黄 原胶在食品行业中的应用,也可以促进黄原胶在石油 三次开采中的应用。
本文推荐企业:山东东达纤维素有限公司(http://www.sdcmcchina.com/),是专业的羧甲基纤维素钠,羧甲基淀粉钠,黄原胶生产型企业,专业生产羧甲基纤维素钠,羧甲基淀粉钠,黄原胶。拥有雄厚的技术力量,先进的生产工艺和设备。东达纤维素有限公司全体员工为海内外用户提供高技术,高性能,高质量的产品。热忱欢迎国内外广大客户合作共赢。